Определение вич методом пцр. Пцр-исследование – современная диагностика вич, спид

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов . ПЦР является высокоэффективной , так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Последовательность ДНК и соответствие нуклеотидов.

Да не оскудеет рука дающего

Проект «СПИД.ВИЧ.ЗППП.» — некоммерческий, созданный добровольцами-экспертами в области ВИЧ/СПИДа за счет своих собственных средств, чтобы донести правду людям и быть чистыми перед своей профессиональной совестью. Будем благодарны за любую помощь проекту. Да воздастся Вам в тысячи крат: ПОЖЕРТВОВАТЬ .

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

• Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
• Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
• Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами , но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез. Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

• Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
• ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
• ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы, полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
• Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.)

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы ).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания , в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей . ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях .

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%. ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд , а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных , для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью .

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК - в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно : медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант) сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем) .

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев.

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов , но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

• Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
• Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

В чём разница между ПЦР и ИФА?

ПЦР определяет сам вирус, а ИФА реакцию (в виде антител) организма на вирус.

ПЦР быстрее определяет наличие вируса, чем ИФА.

Основное различие между этими методами диагностики , состоит в том, что анализ на вирус ВИЧ (СПИД) является более точным, ранним и необходимым для полноценной диагностики и лечения.

Анализ на антитела хоть и не обладает подобной точностью, но имеет неоспоримое преимущество - низкую цену и короткие сроки изготовления.

• Опытные венерологи со стажем более 20 лет
• Срочные анализы на ВИЧ, Сифилис, Гепатит В, Гепатит С - 500 рублей за одну инфекцию, анализы будут готовы за 20 минут
• Лечение анонимное - не потребуется ваш паспорт
• Клиника в центре Москвы в 5 минутах от метро Новокузнецкая или Третьяковская, есть парковка

В клинике «Поликлиника +1» анализы на антитела к ВИЧ (СПИД) можно провести за 20 минут, сдается кровь из вены . Стоимость такого анализа 500 рублей Вы можете сдать этот и другие анализы полностью АНОНИМНО.

Анализы на вирус ВИЧ (СПИД) становятся положительными с 5-7 дня

Анализы на вирус ВИЧ (СПИД) становятся положительными, начиная с 5-7 дня от момента заражения, постепенно повышая процент обнаружения, и достигают к 30-40 дням 100%.

Необходимо заметить, что в ранние сроки от момента возможного заражения можно пройти профилактику от заражения ВИЧ. Такая профилактика хорошо проверена на ВИЧ-инфицированных беременных, рожающих детей. В результате такой профилактики 3 из 4 детей рождаются здоровыми.

Анализы на вирус ВИЧ (СПИД) проводятся в двух вариантах:

• Обнаружение ВИЧ (СПИД) (результат положительно-отрицательно)
• Обнаружение ВИЧ (СПИД) с концентрационной пробой (если анализ положителен, то определяется количество вируса в 1 мл крови). Этот анализ является золотым стандартом диагностики.

Сроки изготовления анализа на вирус ВИЧ (СПИД) колеблются от 3 до 10 дней

Анализы на антитела (ИФА) к ВИЧ (СПИД) зависят от состояния организма и начинают проявляться в виде положительных результатов спустя 2-3 недели, максимальная вероятность обнаружения такого анализа может доходить до 6 месяцев после заражения. При проведении поиска антител на ВИЧ (СПИД) первоначально идет постановка реакций в обычной лаборатории, в случае положительного анализа, кровь отправляется в специализированную лабораторию ВИЧ. В таком случае пациенту сообщается, что его кровь задерживается на 10-15 дней. Выдавать заключение о положительном анализе на антитела к вирусу иммунодефицита человека может только специализированная лаборатория ВИЧ.

В клинике «Поликлиника +1» анализы на антитела к ВИЧ можно провести за 20 минут, для чего осуществляется забор крови из вены.

Стоимость такого анализа 500 рублей . Вы можете сдать этот и другие анализы полностью АНОНИМНО .

Ждем Вас в нашей клинике.

Методами ИФА и ПЦР диагностируется ряд заболеваний, которые передаются половым путем.

При подготовке к обследованию пациентам в течение двух дней нежелательно употреблять жирную еду. Как и анализ крови на вирусы, пробы берутся натощак, последний прием пищи был не позднее 8 часов назад. Исключить из рациона жареное и алкоголь. Соблюдая эти несложные требования, вы приближаете результаты своих обследований к более точным.

В список выявляемых заболеваний входят:

• вирус папилломы человека (ВПЧ);
• хламидии;
• герпес (дополнительно назначается анализ крови на герпес);
• уреаплазма;
• микоплазма;
• гонорея;
• цитомегаловирус;
• трихомониаз;
• токсоплазмоз.

ПЦР на ВИЧ в диагностике на инфекции

В связи с тем, что нет известных симптомов, характерных исключительно для ВИЧ-инфекции, основываясь лишь на жалобах обратившегося пациента, произвести распознавание ВИЧ-инфекции не представляется возможным.

Тестирование на ВИЧ стало необходимостью, т.к. современное мнение общества об этой болезни сводится к тому, что СПИД считают смертельным приговором. Встречались такие случаи, что после нерегулярных сексуальных контактов человек уделяет повышенное внимание сигналам своего организма, находя, а зачастую придумывая все новые признаки смертельной болезни.

Проведение исследования в лабораторных условиях на сегодняшний момент единственный и самый надежный вариант диагностики (анализ крови на ВИЧ). Используют ПЦР для определения следующих проблем со здоровьем:

• для подтверждения или опровержения наличия ВИЧ в период серонегативного окна;
• при сомнительном результате иммуноблота (чтобы установить точное описание патологического процесса);
• при установлении генотипа ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
• для установления и наблюдения за вирусной загруженностью организма;
• для выявления ВИЧ-статуса у новорожденных детей, матери которых являются носителями ВИЧ;
• при переливании крови.

Превосходство метода ПЦР при диагностировании инфекционных заболеваний:

При установлении у обратившегося за медицинской помощью пациента утвердительного результата на ВИЧ-инфекции начинают проводить более глубокие исследования больного для выяснения и уточнения характера заболевания и его течения, а также основания и характера вторичных болезней, уровня поражения иммунитета.

Анализы ИФА и ПЦР: особенности исследования, принципы и расшифровка

Кровь для проведения анализа берется из вены. В период беременности заборы крови на СПИД производятся в неукоснительном порядке. Выводы об отсутствии или присутствии в организме больного вируса иммунодефицита производятся по результатам наличия или отсутствия антител. ИФА нужно производить не сразу после подозрения на заражение, а спустя некоторое время, чтобы в крови пациента образовались антитела. Проходит по разным причинам от 3 недель до 3 месяцев.

Кроме того, выявлено, что результат ИФА может быть и ложноположительным и ложноотрицательным. При очень ранней диагностике на предполагаемую инфекцию, когда антитела к ВИЧ еще не появились, получается ложноотрицательный результат. В таких случаях для уточнения нужно пересдать кровь на ВИЧ по прошествии 1-3 месяцев.

Ложноположительный итог, напротив, может быть получен в случае, когда у обратившегося пациента есть хронические инфекции, онкологические болезни, аутоиммунные заболевания, кроме перечисленных возможны отклонения от нормы и в других ситуациях. Поэтому при утвердительном результате ИФА его непременно перепроверяют наиболее восприимчивыми способами.

ПЦР диагностика входит в ряды нынешних наиболее высокотехнологичных способов проведения исследований, достаточно часто используется при выявлении инфекционных заболеваний. Диагностирование ДНК вобрало в себя несколько различных способов проведения исследований, в большей степени популярен сегодня метод полимеразной цепной реакции, или ПЦР.

В основе этого метода лежит нахождение в тканях для микроисследования малой части ДНК возбудителя данной инфекции. При этом малая часть ДНК заключает в себе пары ДНК количеством до нескольких сотен, которые находятся в строгом порядке.

Метод ПЦР является наиболее точным, с его помощью возможно определение наличия вируса вне зависимости от того, появились антитела или нет. Но, несмотря на свою точность, метод имеет один серьезнейший недостаток, который как раз и вызван его повышенной точностью. Существует достаточно высокая вероятность, что результат окажется ложным. Поэтому в связи с этим методом и в дополнение к нему применяют иные способы для обнаружения генного и антигенного материалов.

Сущность диагностики гепатитов при помощи ПЦР

Существует пять доказанных вирусов, вызывающих болезни печени. Это известные вирусы гепатита А, В, С, D, Е. Очень редкими являются случаи, когда гепатит вызывается вирусом Эпштейна-Барр, который на деле является разновидностью герпеса. Перечисленные вирусы являются представителями разных семейств, что отражается на их лечении в зависимости от вида гепатита.

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК. ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов.

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения.

ПЦР в реальном времени

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР.

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.

Взятие материала для диагностики ВИЧ

Забор биологического материала для проведения диагностики ВИЧ с помощью ПЦР проводится согласно определенным стандартам. Манипуляция проводится в процедурном кабинете. Используются одноразовые стерильные инструменты. Вскрытие пакета с инструментами проводится непосредственно возле пациента. Собранный материал помещается в стерильные пробирки, предварительно обработанные CrO3 (хромовая смесь). В качестве биологического материала выступает венозная кровь, которая сдается в утреннее время и на голодный желудок. За несколько дней до сдачи анализа следует исключить употребление алкоголя, жирной и острой пищи, прекратить прием медикаментозных препаратов.

Если отменить лекарственные средства невозможно, об этом следует сообщить до проведения анализа.

Дополнительно может быть взят мазок из уретры и влагалища, для выявления сопутствующих заболеваний, передающихся половым путем. Исследование проводится анонимно, результаты пациент получает лично в руки. При себе рекомендуется иметь удостоверение личности.

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа?

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа.

Проведение полимеразной реакции у новорожденного

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа. При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА?

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР - не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

• Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
• Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых.
• Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови.

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул - выдается положительное диагностическое заключение. В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный - тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.

Своевременное выявление вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) – залог успешной антиретровирусной терапии. Правильное лечение позволяет вести качественную жизнь более 70 лет, контролируя вирусную нагрузку в организме.

Единственный способ выявления вируса – проведение лабораторных исследований с забором венозной крови у пациента. Предлагаем узнать, через какое время после заражения анализ крови покажет ВИЧ, и как действовать при получении положительного результата?

При наличии даже небольшой вероятности заражения, необходимо сдавать анализы на ВИЧ обоим партнерам. Развитие инфекции носит индивидуальный характер, и вирусная нагрузка у двух пациентов будет отличаться.

Если ваш партнер сдал тест на ВИЧ и получил отрицательный результат, это не означает, что вы здоровы. И, напротив, постановка положительного диагноза партнеру, не значит, что вы инфицированы.

Забор венозной крови позволяет обнаружить антитела, выработанные организмом в ответ на вирус. Сдача анализов рекомендована одновременно обоим партнерам. Помните, чем раньше вы узнаете об инфицировании, тем больших результатов удастся добиться при терапии.

Фазы и симптомы заболевания

Через сколько проявляются симптомы ВИЧ? Первые признаки наблюдаются через 14-21 день после заражения.

Через сколько проявляется СПИД? Симптомы заболевания

После незащищенного полового акта или с момента заражения иным путем вирус размножается в организме человека, повышая вирусную нагрузку. Отсутствие лечения (антиретровирусной терапии) приводит к развитию СПИД через 10-12 лет.

Внимание! При правильной ВААРТ и с условием соблюдения всех рекомендаций врача удастся контролировать вирусную нагрузку и замедлить переход вируса в стадию СПИДа.

Симптомы СПИДа:

• частые инфекционные заболевания,
• бледность кожи,
• выпадение волос и зубов,
• боли в суставах,
• хрупкость костных тканей (высокая вероятность переломов).

Виды анализов на ВИЧ

Сдавать кровь на ВИЧ можно в государственной поликлинике, частной лаборатории или в специальных центрах борьбы со СПИДом. От вида анализа зависит подготовка к забору крови, срок лабораторного исследования и вероятность получения ложного результата.

Иммуноблотинг

Иммуноблотинг (вестерн-блот) – высокочувствительный метод распознавания ВИЧ, суть которого состоит в разделении белков вируса. Они перемещаются на нитроцеллюлозную мембрану, а затем антигены, отличающиеся по молекулярному весу, сравниваются с образцами на тест-полоске.

Особенностью имунноблотинга является возможность определения стадии инфицирования, что позволяет начать немедленное лечение. Когда сдавать анализ на ВИЧ этим методом ? Обычно он назначается при получении положительного или неопределенного результата РПГА и ИФА.

Экспресс-анализ

Быстро обнаружить наличие вируса позволяет экспресс-анализ крови, мочи и слюны. Результат исследования биологических жидкостей становится известен через 1-1,5 часа с момента сдачи. Минусом способа является высокая вероятность недостоверного результата, если заражение произошло недавно.

Диагностика ПЦР

ПЦР-диагностика выявляет вирус на уровне ДНК и является наиболее точным способом определения инфицирования. Вероятность получения недостоверного результата составляет всего 1%.

Результат диагностики ПЦР известен через 3 дня после забора крови. Особенность методики заключается в том, что она основывается на выявлении клеток самого вируса, а не поиске выработанных антител.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) базируется на выявлении антител к ВИЧ. Производится забор венозной крови (строго натощак!), которая проверяется на наличие выработанных организмом антител.

ИФА – наиболее распространенный метод диагностики ВИЧ.

Через какое время готовы анализы на ВИЧ?

Результаты большинства анализов на ВИЧ становятся известны в продолжение 3-10 дней с момента их сдачи. Срок определяется уровнем материально-технического оснащения лаборатории и степенью её загруженностью.

Перед сдачей анализа:

• НЕ принимайте пищу за 8 часов до приема, сдавайте кровь натощак;
• НЕ употребляйте алкоголь;
• НЕ пейте газированную воду, соки и другие напитки, за исключением чистой воды и несладкого чая;
• НЕ принимайте антибиотики и другие лекарственные препараты.

В каких случаях нужно делать анализ на ВИЧ?

Регулярная сдача анализов на обнаружение инфекции рекомендована гомосексуалистам, медицинским работникам и детям, если они были рождены ВИЧ-положительной матерью.

Сдача анализа на вирус иммунодефицита человека необходима:

• после незащищенного полового контакта с непроверенным партнером,
• после изнасилования,
• при увеличении лимфатических узлов и резкой потере веса,
• при частых вирусных заболеваниях,
• после переливания крови, пересадки мягких тканей или внутренних органов,
• при постановке диагноза ВИЧ партнеру.

Что делать, если все-таки будет обнаружен ВИЧ?

При обнаружении ВИЧ немедленно обратитесь к специалисту Центра по профилактике и борьбе со СПИДом. Он выдаст направление на прохождение медицинского осмотра для выявления сопутствующих заболеваний и возможных осложнений.

На основании результатов анализов и осмотра составляется схема антиретровирусной терапии. Она заключается в ежедневном приеме (2-3 раза в сутки) препаратов, подавляющих размножение вируса.

Если был риск заражения ВИЧ, когда можно делать тест?

Первые признаки проявления инфекции у 70-75% пациентов наблюдаются через 14 дней после заражения (воспаление горла, повышение температуры, быстрая утомляемость ). К сожалению, большинство инфицированных списывает их на простуду.

Анализ крови на применение метода ПЦР сдается по истечению 2-х недель с момента предполагаемого заражения. При проведении стандартного тестирования ИФА вирус удастся обнаружить только через 3-5 месяцев.

В течение этого периода вирус развивается и размножается в организме, что приводит к повышению вирусной нагрузки и позволяет определить инфекцию. Важно, что у каждого человека индивидуальный инкубационный период.

Если результат отрицательный, значит больше не надо волноваться?

Если по результатам анализов вынесен отрицательный диагноз, но с момента предполагаемого заражения не прошло более полугода, вероятность инфицирования сохраняется. Рекомендуется повторно сдать венозную кровь еще через 3 месяца после первоначального исследования.

Причины ложноотрицательного результата могут быть связаны с невысокой скоростью размножения вируса (повышения вирусной нагрузки), определенными заболеваниями или несоблюдением рекомендаций перед сдачей крови.

Вы можете не волноваться, если после повторной сдачи анализов на ВИЧ отрицательный результат подтвердился.

Что делать если результат теста отрицательный, но до сих пор есть симптомы?

К сожалению, определение ВИЧ по симптомам – не допускается. Диагноз устанавливается только на основании результатов лабораторных исследований (иммунноблоттинга, ИФА и др.). Если отрицательный диагноз подтвержден вторичным анализом, то проявляющиеся симптомы являются следствием других заболеваний.

Насколько достоверен положительный результат теста?

Вероятность того, что положительный результат теста – ложный, сведена к 1% у анализа при диагностике по методике ПЦР. При других исследованиях риск получения ложнополжительного результата гораздо выше, поэтому при подтверждении диагноза проводятся повторные анализы!

Причины ложноположительного результата:

• сахарный диабет,
• беременность,
• онкологические заболевания,
• ЗППП,
• гепатит.

Что такое неопределенный результат?

Неопределенный результат означает наличие в иммуноблоте хотя бы одного набора белков к вирусу. Обычно он устанавливается, если заражение произошло недавно и у пациента невысокая вирусная нагрузка.

При неопределенном результате повторный тест сдается через 3 и 6 месяцев. Весь этот период пациент находится под наблюдением врача.

Расшифровка результатов

Показатели тест-систем отличаются (в зависимости от выбранного анализа), но при обнаружении 3-х основных наборов белков ставится положительный диагноз.

Результаты сдачи венозной крови:

Итак, определить ВИЧ в организме можно только с помощью анализов. Не медлите со сдачей венозной крови при наличии вероятности инфицирования!